產(chan)品名稱：pMD 18-T Vector Cloning Kit  PMD18-T vector  載體

產(chan)品(pin)貨(huo)號：6011

產品說(shuo)明：

制(zhi)品內容

pMD 18-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支

Control Insert (50 ng/μl) 10 μl × 1 支

Solution I* 75 μl × 2 支

* 使用(yong)時請于冰中融解。  

■ 制品說明

pMD 18-T Vector是一種高效克(ke)(ke)隆PCR產物 (TA Cloning) 的(de)(de)載體(ti)。本(ben)載體(ti)由pUC18載體(ti)改建而成，在(zai)pUC18載體(ti)的(de)(de)多克(ke)(ke)隆位點(dian)(dian)處的(de)(de)Xba I 和Sal I 識(shi)別(bie)位點(dian)(dian)之(zhi)間(jian)插入了EcoR V 識(shi)別(bie)位點(dian)(dian)，用(yong)EcoR V 進行酶切反應后，再在(zai)兩側的(de)(de)3′端添加 “T” 而成。因大(da)部分(fen)耐熱性DNA聚合酶進行PCR反應時都有(you)在(zai)PCR 產物的(de)(de)3′末端添加一個 “A” 的(de)(de)特性，所以使用(yong)本(ben)制(zhi)品可以大(da)大(da)提高PCR產物的(de)(de)連接、克(ke)(ke)隆效率。

由(you)于(yu)(yu)本(ben)載(zai)(zai)體以(yi)pUC18載(zai)(zai)體為基礎構(gou)建而(er)成(cheng)(cheng)，所以(yi)它具(ju)有(you)同pUC18載(zai)(zai)體相同的(de)功(gong)能。此外，本(ben)制品中的(de)高效連(lian)接(jie)液Solution I 可以(yi)在(zai)短時間內(nei) (約30分鐘) 完(wan)成(cheng)(cheng)連(lian)接(jie)反應(ying)，其連(lian)接(jie)液可以(yi)直接(jie)用于(yu)(yu)細菌轉(zhuan)化(hua)，大(da)大(da)方便了(le)實驗操作。本(ben)制品中的(de)Control Insert (500 bp) 還可以(yi)用于(yu)(yu)Control反應(ying)。

■ 保存

-20℃。

■ 純(chun)度

Control Insert經克隆(long)后的(de)白色菌落中(zhong)，有(you)90%以(yi)上含有(you)Insert DNAp段。

■ 用途

1. 進行TA克隆，克隆PCR產物。

2. 對克隆后的PCR產物使用(yong)BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers進(jin)行DNA測序。

■ pMD 18-T Vector的(de)結構

■ 注意事項

1. Solution I 請于冰中融解。

2. 克(ke)隆時使(shi)用的Insert DNAp段(duan)(duan) (PCR產(chan)物(wu)) 建(jian)議進行切膠回收純化，否(fou)則PCR產(chan)物(wu)中的短片段(duan)(duan)DNA (甚至是(shi)電(dian)泳也無法確認的非特異(yi)性小片段(duan)(duan))、殘(can)存引(yin)物(wu)等雜(za)質都會影響TA克(ke)隆效率。

3. 按照本實(shi)驗操作進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)連接(jie)后，直接(jie)進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)轉(zhuan)(zhuan)化時的連接(jie)液不(bu)要超過20 μl。當要轉(zhuan)(zhuan)化的DNA量較(jiao)大或準備進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)電(dian)轉(zhuan)(zhuan)化時，需對(dui)連接(jie)液進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)乙醇沉淀，純化DNA后再進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)轉(zhuan)(zhuan)化。進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)乙醇沉淀時使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回(hui)收率(lv)。

4. 連(lian)接(jie)反應請(qing)在(zai)25℃以下進行，溫度升高(gao) (>;26℃) 較(jiao)難(nan)形成(cheng)環狀DNA。連(lian)接(jie)效率偏低時(shi)，可適當(dang)延長(chang)連(lian)接(jie)反應時(shi)間至數小時(shi)。

5. 本(ben)制品來源于(yu)pUC18載體(ti)，因(yin)此，適合pUC18載體(ti)的感受態細胞都(dou)可以使用，如：JM109等。

產品名稱：TAKARA pMD 18-T Vector Cloning Kit        產品貨號：6011

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